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单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法

发布日期:2020年04月01日 阅读量:

1、李斯特氏菌的生物学特性

该菌为革兰氏阳性无芽孢杆菌,在纯培养物中呈短小杆菌,在初龄培养物中呈球杆菌状,在老龄培养物中呈长丝的长杆菌状,有些细菌因此而变成革兰氏阴性;为需氧或兼性厌氧菌,在20~25℃培养时能形成4根鞭毛,运动活泼;在37℃培养时无鞭毛,运动消失。
该菌对营养要求不高,在普通营养培养基上即能生长,最适于含有CO2的微需氧环境中生长。生长温度为1~45℃,而以30~37℃最合适,能在普通冰箱冷藏室生长,具有耐冷特性,是冷冻饮品食物中毒的重要致病菌之一。

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号称冰箱里的杀手的单核细胞增生李斯特氏菌

2、李斯特氏菌的分类

李斯特菌属(Listeria)现分为2群7种,分别是单核细胞增生性李斯特菌(L.monocytogenes 以下统称 LM)、伊氏李斯特菌(L.ivanovii)(也称绵羊李斯特菌)、英诺克李斯特菌(L. innocua)(也称无害李斯特菌)、韦氏李斯特菌(L.welshimei)、塞氏李斯特菌(L.seeligeri)、格氏李斯特菌(L.gmyi)和莫氏李斯特菌(L.murmyi)。其中LM是引起动物和人类疾病的重要致病菌。LM是李斯特菌属中致病力最强的细菌,也是迄今发现唯一能对人致病的、典型的胞内寄生菌,能在巨噬细胞、上皮细胞、内皮细胞和肝细胞内增殖。

3、LM的致病性

LM轻则能导致肠胃炎,重症能引起能引起人和动物患脑膜炎、脑炎、败血症、心内膜炎、流产、脓肿和局部的脓性损伤,可造成孕妇流产、死胎等疾病,发病者死亡率可达20%~70%。

4、LM的检查方法

1)传统微生物培养方法:国标法GB 4789.30—2010检验程序

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2)免疫学检测方法(聚合酶免疫检测方法EIA):对LM菌抗原有高度特异性的抗体固定在微孔内壁上,经增菌培养后的样品和阳性对照加到检测板的微孔内。如有LM菌抗原存在,则在微孔内形成抗体—抗原混合物,用405~410nm的光度计读数,计算临界值,可疑阳性结果需经培养方法证实。

自动酶联荧光免疫检测系统(VIDAS):对李斯特菌属全部筛检,VIDASLMO只对李斯特菌属中主要致病菌——单增李斯特菌的筛检。李斯特菌抗原鉴别是基于在VIDAS仪器内进行酶联荧光免疫分析

3)分子生物学技术:

常规PCR法:利用PCR-限制酶分析,脉冲凝胶电泳和DNA探针对李斯特氏菌进行鉴定和分型;

DNA探针技术:用特异性DNA探针进行LM菌核糖体RNA(rRNA)的检测,检测样品经前增菌和二次增菌后溶解细菌,加入标记好的LM特异性DNA探针用于液相杂交,在450nm处测量吸光值,吸光值大于临界值则表明在待检的样品中存在LM;

Lamp技术(环介导等温扩增):lamp技术不需要热循环,为等温扩增,lamp反应中将会产生的大量副产物—白色焦磷酸镁沉淀,扩增产物不经过电泳,通过肉眼观察即可观察结果。广州双螺旋基因技术有限公司推出恒温荧光检测仪,以恒温PCR技术为核心,采用实时荧光检测的方法,直观反应扩增结果,操作简单,只需四步即可检验食品中的LM。