怎么知道三文鱼有没有感染异尖线虫？

近日，在央视报道“青藏高原很早以前就开始养殖三文鱼，目前已经占据了国内三文鱼三分之一的市场”之后，有关“淡水三文鱼能不能生吃”的争论一直在持续。青海龙羊峡水库检测寄生虫的操作更是引起广大网友质疑。

青海龙羊峡水库镜检寄生虫

那么，检测三文鱼的寄生虫主要是检测什么？又有什么样的检测方法呢？

在感染三文鱼的寄生虫中，以异尖线虫（Anisakis）最为臭名昭著。异尖线虫不仅能感染三文鱼，也能感染同为哺乳动物的人类。

异尖线虫

异尖线虫，又称海兽胃线虫。属于线虫的一种寄生虫，通体白色。属于线虫动物门、胞管肾纲、蛔目、异尖科。

异尖线虫的形态结构

异尖线虫的生活史

①成虫附于最终宿主（last host）的胃或肠道黏膜，产卵在寄主肠道且随粪便至海中。

②卵在海中发育2~3期幼虫为海洋甲壳类摄食入体内，此时海洋甲壳类为为第一中间宿主（primary middle host）。

③海洋甲壳类动物被鱼类或是乌贼等第二中间宿主（secondary middle host）摄食进入体内，侵入中间宿主的体腔或是肌肉内，幼虫在此时并不发育。

④海洋哺乳类（海豹、海狮、海豚、海狗、海象、鲸鱼）摄食第二中间宿主，幼虫会在其肠道发育为第三期幼虫、成熟的成虫，并交配产卵。

⑤人类为此病原的终结宿主（dead-end host），人不是异尖线虫的适宜宿主，进入人体的幼虫并不变为成虫，而是在胃肠内形成一种被称为好酸球性肉芽肿的病变。

可引起人体异尖线虫病（anisakiasis）的虫种主要有5属：即异尖线虫属、海豹线虫属、钻线虫属、对盲囊线虫属和鲔蛔线虫属。

在人体寄生的虫体均为第3期幼虫，中肠部体宽为430~550μm，无侧翼，幼虫黏附胃肠道黏膜或入组织，引起恶心、下痢、呕吐、荨麻疹等不适症状。

检测异尖线虫的方法有3种：镜检法、PCR法、恒温PCR法。

（1）临床观察

观察判定待检鱼的种类、来源。检查临床症状、大体情况。

（2） 剖检

测量每条鱼的质量及长度；解剖鱼体，观察病理变化，检查腹腔、胃、肠、肠系膜、肝、生殖腺等器官及肌肉组织等处有无虫体或褒包。

（3） 病理变化观察

检查、观察消化道、腹腔及内脏等各处病理变化。

（4） 虫体检查

用小摄子、昆虫针、手术刀轻轻取出虫体或从褒包内分离出虫体，将虫体置于0. 85% 生理盐水培养皿中，清除虫体周围杂物，迅速观察并计数，虫体立即用5% 福尔马林固定，将固定之虫体置于乳酸酚甘油混合液中透明后，观察虫体外形及内部形态。观察虫体用带测微尺的显微镜，将虫体置于载玻片上，先在低倍镜，进一步用高倍镜观察，测量、描绘、记录虫体形态结构，必要时做显微摄影。

（5）结果

主要依据对鱼类剖检，发现虫体，其特征符合者，可判断为本病阳性。

剖检发现相应病变和虫体，虫体特征符合异尖线虫病病原特征者，判断为本病阳性。

剖检未发现明显病变，但检出符合异尖线虫病病原特征的虫体者，判断为本病阳性。

剖检发现其他线虫者，判断为相应的线虫感染。

镜检的特点：

✘ 要求操作人员专业性较强

✘ 对异尖线虫的生活史较熟悉

PCR法

（1）DNA 的提取

提取异尖线虫样品的DNA。

（2）PCR 扩增

DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下氢键断裂，形成单链DNA。

退火（60℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。

延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。

（3）PCR 产物电泳与测序

取 PCR 产物加入漠酚蓝指示剂溶液，混匀，用1. 0% 琼脂糖于TAE 缓冲溶液中电泳分离紫外透射仪下检查是否存在目的条带。存在目的条带，则取PCR 扩增产物测序。得到的序列与GcnBank 数据库中的参考序列进行比对。

（4）结果

PCR 扩增产物测序，序列与参考序列进行比较，序列相似性仵98% 以上者，判定虫体为简单异尖线虫幼虫。

PCR法的特点：

✘ 要求操作人员对PCR的原理较为熟悉

✘ 实验操作能力较强

恒温PCR法

广州双螺旋基因技术有限公司推出了异尖线虫核酸检测试剂盒，异尖线虫(Ani)核酸检测试剂盒（一管式恒温荧光法）可结合Dhelix Q5水产病害检测仪，利用恒温PCR原理，在65°C的恒温条件下反应，利用Bst DNA聚合酶完成置换扩增。双螺旋基因生产的异尖线虫(Ani)核酸检测试剂盒基于独特的恒温荧光检测技术，可针对食品、动物组织等样品中病原的特异核酸片段进行扩增，通过实时扩增曲线判定结果。本产品用于对异尖线虫（Ani）的检测，检出限为103copies/μl 基因组DNA。

恒温PCR法的特点：

☑ 全面：30多种病害

☑ 快速：60分钟可出结果

☑ 专业：研发能力强大，产品更新快速，检测病害种类全面（细菌、病毒、寄生虫）

☑ 简便：移动携带现场检测